尊龙凯时
RNA pulldown
- RNA连系尊龙凯时质
- 高迅速度
- 高度特异性
- 可定量剖析
效劳特色
金开瑞现提供RNA pull down检测技术效劳，，，，， ，使用特异性二抗举行检测，，，，， ，能有用阻止抗体重链对效果的信号滋扰。。。 。。并且金开瑞配套自己的质谱平台，，，，， ，能显著提升检测效果。。。 。。
效劳介绍
尊龙凯时质与RNA的相互作用是许多细胞功效的焦点，，，，， ，如尊龙凯时质合成、mRNA组装、病毒复制、细胞发育调控等。。。 。。使用体外转录法标记生物素RNA探针，，，，， ，然后与胞浆尊龙凯时提取液孵育，，，，， ，形成RNA-尊龙凯时质复合物。。。 。。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠连系，，，，， ，从而与孵育液中的其他因素疏散。。。 。。复合物洗脱后，，，，， ，通过WB实验检测特定的RNA连系尊龙凯时是否与RNA相互作用。。。 。。若待检测目的尊龙凯时明确，，，，， ，选择WB判断；； ；；；若不明确，，，，， ，则可选择质谱判断。。。 。。
效劳优势
- 高特异性：富集与特定RNA序列相互作用的尊龙凯时质，，，，， ，具有高度的特异性
- 高迅速度：能够检测低品貌的RNA连系尊龙凯时质，，，，， ，提供高迅速度的检测能力
- 普遍适用性：可用于研究种种RNA连系尊龙凯时质，，，，， ，包括转录因子、RNA连系尊龙凯时和翻译调控因子等
- 可定量剖析：通过引入外源标记或荧光标记的RNA探针，，，，， ，可以定量丈量RNA与尊龙凯时质的连系强度
- 联合应用：可与其他技术相连系，，，，， ，如质谱剖析、尊龙凯时质组学要领和转录组学要领等，，，，， ，进一步深入研究RNA-尊龙凯时质相互作用的功效和调控网络
效劳流程
客户提供
RNA序列或者RNA序列构建的质粒（种属）
相同种属的细胞样品
最终交付
- 基因合成测序报告；； ；；；
- 构建含目的基因的质粒、菌液，，，，， ，测序报告；； ；；；
- 体外转录模版的sense&antisense引物、模版电泳图；； ；；；
- RNA Pull down尊龙凯时SDS-PAGE银染；； ；；；
- 质谱判断报告。。。 。。
效劳说明
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效劳名称 |
效劳内容 |
交付内容及标准 |
效劳周期(事情日) |
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RNA pull down-WB/qPCR （体外转录法） |
pull down前检测 |
WB或qPCR检测1个猎物的实验前本底表达 |
25 |
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扩增DNA模板 |
扩增sense和antisense DNA单链 |
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RNA转录及?物素标记 |
以DNA单链为模板，，，，， ，转录RNA后标记?物素并进?黑点杂交质控 |
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RNA pull down富集 |
比照组和实验组各富集?次 |
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pull down后检测 |
WB或qPCR检测1个猎物的实验后比照组、实验组、input组 |
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RNA pull down-MS （体外转录法） |
扩增DNA模板 |
扩增sense和antisense DNA单链 |
35
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RNA转录及?物素标记 |
以DNA单链为模板，，，，， ，转录RNA后标记?物素并进?黑点杂交质控 |
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RNA pull down富集 |
比照组和实验组各富集?次 |
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质谱判断 |
含银染及2组（实验组和比照组）质谱判断剖析 |
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RNA pull down-WB/qPCR (探针法) |
pulldown前检测 |
WB或qPCR检测1个猎物的实验前本底表达 |
29 |
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诱饵本底表达检测及 探针设计合成 |
包括实验探针和比照探针设计合成 |
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探针富集效果检测 |
实验探针和比照探针各1次 |
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RNA pull down富集 |
实验探针和比照探针各1次 |
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pulldown后检测 |
WB或qPCR检测1个猎物的实验后比照组、实验组、input组 |
39 |
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RNA pull-down-MS (探针法)
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诱饵本底表达检测及 探针设计合成 |
包括实验探针和比照探针设计合成 |
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探针富集效果检测 |
实验探针和比照探针各1次 |
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RNA pull down富集 |
实验探针和比照探针各1次 |
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质谱判断 |
含银染及2组（实验组和比照组）质谱判断剖析 |
案例展示
常见问题与剖析 (Q&A)
RNA pull down使用体外转录法标记生物素RNA探针，，，，， ，然后与胞浆尊龙凯时提取液孵育，，，，， ，形成RNA-尊龙凯时质复合物。。。 。。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠连系，，，，， ，从而与孵育液中的其他因素疏散。。。 。。复合物洗脱后，，，，， ，通过western blot实验检测特定的RNA连系尊龙凯时是否与RNA相互作用。。。 。。 尊龙凯时质与RNA的相互作用是许多细胞功效的焦点，，，，， ，如尊龙凯时质合成、mRNA组装、病毒复制、细胞发育调控等。。。 。。若待检测目的尊龙凯时明确，，，，， ，选择Western blot判断；； ；；；若不明确，，，，， ，则可选择质谱判断。。。 。。
LncRNA的富集大致上有三种要领: (1)探针法：针对该LncRNA的序列，，，，， ，设计生物素标记的探针。。。 。。此种要领最要害的是探针的特异性，，，，， ，以是最好用Northern Blot检测探针的特异性。。。 。。 可以连系内源的LncRNA是探针法的最大优势。。。 。。弱点就是较量贵，，，，， ，需要的样品量大。。。 。。 (2)生物素标记法：在LncRNA的5‘端加上T7启动子，，，，， ，使用体外转录试剂盒，，，，， ，可以制备大宗的LncRNA。。。 。。再通过生物素标记试剂盒，，，，， ，就能获得大宗的生物素标记的LncRNA。。。 。。常用的折叠的要领退火，，，，， ，从95℃退火到4℃，，，，， ，约莫30秒一度就可以了。。。 。。 (3)TRSA法：除了生物素，，，，， ，链霉亲和素还可以识别TRSA结构，，，，， ，因此在LncRNA的一端加上TRSA序列也是不错的选择。。。 。。
可以，，，，， ，条件是circRNA在细胞中表达品貌要高。。。 。。
有，，，，， ，探针法和生物素标记法的比照都是响应的反义序列：探针的反义序列以及长非编码RNA的反义序列。。。 。。TRSA法的比照是TRSA序列自己。。。 。。
相关资源
1、RNA pull-down的实验办法
● 设计和合成RNA探针：凭证目的RNA序列的特定区域设计和合成RNA探针，，，，， ，通常使用化学修饰或放射性标记来标记RNA探针。。。 。。
● 准备RNA连系反应系统：将RNA探针与细胞提取物、组织提取物或体外合成的尊龙凯时质混淆，，，，， ，形成RNA-尊龙凯时质复合物的反应系统。。。 。。浚浚可以添加适当的缓冲液和辅助物质来维持反应条件和增添特异性。。。 。。
● 举行RNA pulldown：将RNA探针与固相质料（如琼脂糖珠子或磁珠）连系，，，，， ，通过亲和吸附的方法富集目的RNA-尊龙凯时质复合物。。。 。。浚浚可以使用离心管、微量管或固相提取柱等差别形式的富集质料。。。 。。
● 洗涤和纯化：对富集的RNA-尊龙凯时质复合物举行洗涤，，，，， ，以去除非特异性连系的尊龙凯时质和其他杂质。。。 。。浚浚可以使用适当的洗涤缓冲液来实现选择性的洗涤办法。。。 。。
● 尊龙凯时质判断和剖析：对富集的RNA-尊龙凯时质复合物举行尊龙凯时质判断和剖析，，，，， ，常用的要领包括质谱剖析（如质谱判断或定量尊龙凯时质组学），，，，， ，Western blotting等。。。 。。这些剖析要领可以资助判断和定量与目的RNA相互作用的尊龙凯时质。。。 。。
2、RNA pull-down应用场景
● 判断RNA连系尊龙凯时质：用于筛选和判断与特定RNA序列连系的尊龙凯时质，，，，， ，展现RNA的连系朋侪和调控网络。。。 。。
● 研究RNA连系尊龙凯时质的功效：通过RNA pull-down实验，，，，， ，可以评估RNA连系尊龙凯时质的功效，，，，， ，包括转录调控、RNA稳固性和翻译调控等。。。 。。
● 研究RNA修饰修饰酶：可以用于判断与特定RNA修饰酶相互作用的尊龙凯时质，，，，， ，相识RNA修饰的机制和调控。。。 。。
● 探索RNA与疾病相关尊龙凯时质的相互作用：通过RNA pull-down实验，，，，， ，可以展现RNA与疾病相关尊龙凯时质的相互作用，，，，， ，并深入相识其在疾病爆发和希望中的作用。。。 。。
3、研究RNA-尊龙凯时质相互作用的几种常用技术简介、优势和适用规模
| 技术 |
简介 |
优势 | 适用规模 |
| RNA pull-down |
RNA pull-down技术用于研究RNA与与其相互作用的尊龙凯时质之间的相互作用。。。 。。该技术使用RNA的特异性连系能力，，，，， ，通过将RNA靶点牢靠在固相支持上，，，，， ，然后与细胞提取物或纯化的尊龙凯时质混淆，，，，， ，通过共沉淀实验检测RNA-尊龙凯时质的相互作用。。。 。。 |
- 可以直接检测RNA与尊龙凯时质之间的相互作用。。。 。。 | - 研究RNA与尊龙凯时质之间的相互作用。。。 。。 |
| - 可以筛选和判断与特定RNA相互作用的尊龙凯时质。。。 。。 | - 展现RNA在基因调控和细胞功效中的作用。。。 。。 | ||
| - 可以展现RNA在基因调控和细胞功效中的作用。。。 。。 | - 研究RNA加入的信号通路和疾病机制。。。 。。 | ||
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- 可以与其他技术相连系，，，，， ，如质谱剖析和转录组学要领，，，，， ，进一步研究RNA-尊龙凯时质相互作用的功效和调控网络。。。 。。 |
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| CLIP-seq |
CLIP-seq技术（Cross-linking and immunoprecipitation followedby high-throughput sequencing）用于判断RNA与与其相互作用的尊龙凯时质之间的连系位点。。。 。。该技术连系了RNA与尊龙凯时质的共价交联和免疫共沉淀，，，，， ，通过高通量测序剖析交联后的RNA和连系尊龙凯时质，，，，， ，判断它们的相互作用位点。。。 。。 |
- 可以判断RNA与特定尊龙凯时质之间的连系位点。。。 。。 | - 判断RNA与尊龙凯时质之间的连系位点和相互作用模式。。。 。。 |
| - 可以全基因组规模内剖析RNA-尊龙凯时质相互作用的模式和特征。。。 。。 | - 展现RNA加入的调控网络和疾病机制。。。 。。 | ||
| - 可以展现RNA加入的调控网络和疾病机制。。。 。。 | - 研究RNA加入的信号传导和细胞功效。。。 。。 | ||
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- 可以提供高区分率的RNA-尊龙凯时质相互作用图谱。。。 。。 |
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| RNAi |
RNA滋扰（RNA interference，，，，， ，RNAi）是一种通过引入特定的小分子RNA（siRNA或shRNA）来抑制特定基因表达的技术。。。 。。该技术可以靶向特定的RNA序列，，，，， ，并降低或抑制目的基因的表达。。。 。。 |
- 可以高度特异性地抑制目的基因的表达。。。 。。 | - 研究基因功效和基因调控。。。 。。 |
| - 可以举行基因功效研究、基因默然和表达调控的实验。。。 。。 | - 高通量筛选和功效验证。。。 。。 | ||
| - 可以在细胞和整个生物体中举行基因敲除或敲下实验。。。 。。 | - 研究信号传导和疾病机制。。。 。。 | ||
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- 可以研究基因调控、信号通路和疾病爆发气制。。。 。。 |
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| RIP |
RIP（RNA Immunoprecipitation）技术用于研究RNA与与其相互作用的尊龙凯时质之间的相互作用。。。 。。该技术通过使用抗体特异性地免疫共沉淀RNA与其连系的尊龙凯时质，，，，， ，从而判断和剖析RNA-尊龙凯时质复合物。。。 。。 |
- 可以判断RNA与特定尊龙凯时质之间的相互作用。。。 。。 | - 研究RNA与尊龙凯时质之间的相互作用。。。 。。 |
| - 可以研究RNA加入的转录调控、翻译调控和RNA稳固性等历程。。。 。。 | - 展现RNA加入的转录调控和翻译调控历程。。。 。。 | ||
| - 可以展现RNA-尊龙凯时质相互作用在细胞功效和疾病爆发中的作用。。。 。。 | - 研究RNA-尊龙凯时质相互作用在细胞功效和疾病爆发中的作用。。。 。。 | ||
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- 可以与高通量测序等技术相连系，，，，， ，获得全基因组规模内的RNA-尊龙凯时质相互作用图谱。。。 。。 |
